Anti nøytrofil cytoplasmatiske autoantistoffer (ANCA)

Utredning av systemiske vaskulitter.

Analyse for ANCA utføres på to måter:

1. Indirekte immunfluorescens (ANCA IIF)
2. Enzyme Linked Immuno Assay (EliA)

Begge metodene utføres når det rekvireres ANCA utredning.

Ved ANCA oppfølging analyseres det kun med EliA.

Det finnes mange spesifisiteter av ANCA. De gir to typer fluorescensmønster ved oppsett på IIF: Perinukleært mønster, og /eller cytoplasmatisk mønster, h.h.v. P-ANCA og C-ANCA.

Hovedsakelig er det autoantistoff mot Proteinase 3 (PR3-ANCA) og Myeloperoxidase (MPO-ANCA) som har diagnostisk verdi. Disse to spesifisitetene påvises ved EliA-metodikk.

Av og til vil det være uoverensstemmelse mellom metodene. Dette kan skyldes ulik sensitivitet, eller at det påvises et annet antinøytrofilt cytoplasmatisk antistoff enn PR3 eller MPO.

Rekvirering i DIPS

Det er opprettet 2 pakker for ANCA testing:

• ANCA UTREDNING: Bestilles ved utredning av ANCA assosierte vaskulitter. Når denne rekvirers blir ANCA analysert både ved IIF og EliA (PR3 og MPO), i tillegg blir C3 og C4 også analysert.
• ANCA OPPFØLGING: Brukes ved oppfølging av etablert ANCA-vaskulitt diagnose. Pakken inneholder kun EliA testene (PR3 og MPO). Dette medfører kortere svartid og velges ved kontroll av pasienter med etablert diagnose.

Analysering:

ANCA EliA analyseres alle virkedager, ANCA ved IIF analyseres 3 ganger i uken. Svar utgis samlet når begge testene er ferdig analysert. Ved nyoppdaget MPO eller PR3 hos en inneliggende pasient kontaktes rekvirent telefonisk før svaret er sendt ut i DIPS for å unngå forsinkelse. 

Ø-hjelp

Ved behov for ø-hjelps analysering må prøven merkes tydelig med ø-hjelp.

I ordinær arbeidstid (07:30-14:00): Kontakt lab. påtelefon 67961232.

På kveld vanlig dag (etter kl. 14:00)/helg eller helligdag: Kontakt lab på telefon 67964300. ANCA EliA settes da opp ekstra etter avtale med vakthavende lege på IMTRA. ANCA IIF ved ø-hjelp analyseres sammen med neste planlagte oppsett ev. etter det som blir avtalt.  

1 ml serum. Oppbevares kjølig, kan sendes med vanlig post. Lipemisk, hemolysert eller kontaminert prøve kan gi unøyaktige resultater og skal ikke brukes. Prøver oppbevares i 14 dager i kjølerom 2- 8° , deretter fryses de ned ved -20° i ytterligere 2 uker (tilsammen 4 uker fra prøvetakingsdato) i tilfelle etterrekvirering.

Generelt/ metode

Prøvene analyseres i en fortynning 1:20. Slides med etanolfikserte nøytrofile granulocytter brukes til å avdekke mønster på ANCA. Slides med formalin fikserte nøytrofile granulocytter brukes som konfirmerende test på om mønsteret sett ved etanolfikserte slides representerer reel ANCA eller ikke.

Svarutgivelse

Svar utgis som positiv C-ANCA, positiv P-ANCA eller Negativ

Generelt/ metode

Testen påviser IgG antistoff hos pasienten rettet mot PR3 og MPO ved hjelp av EliA teknikk. EliA PR3 brønnen er dekket med humant PR3 protein (proteinase-3) renset fra humane granulocytter. EliA MPO brønnen er dekket med humant rekombinant-MPO protein (myeloperoksidase) renset fra humane granulocytter.

Referanseområde

ANCA resultat må alltid tolkes sammen med klinikk. Positiv ANCA sees ofte ved granulomatose med polyangitt (GPA), mikroskopisk polyangitt (MPA), eosinofil granulomatose med polyangitt (EGPA, Churg-Strauss), “renal-begrenset” vaskulitt (Pauci immune vaskulitt), og noen medikamentinduserte vaskulitt syndromer (se tabell). ANCA har da enten MPO eller PR3 spesifisitet (sjelden begge samtidig). C-ANCA assosieres med PR3 og P-ANCA med MPO. Andre ANCA-spesifisiteter kan sees ved revmatiske sykdommer, gastrointestinale sykdommer og autoimmun hepatitt etc. ANCA ved IIF alene (atypisk ANCA) er ikke spesifikk for systemiske vaskulitter. Antistoffer mot lactoferrin, elastase, katepsin G, katalase, lysozym og beta-glukorinodase m.fl. kan gi positiv P-ANCA mønster ved IIF uten at det foreligger en vaskulitt hos pasienten. MPO og PR3 har større positiv prediktiv Verdi og høyere spesifisitet for systemiske vaskulitter. Negativ ANCA utelukker ikke vaskulitt diagnosen hvis sterk klinisk mistanke.

Tabell: Oversikt over de forskjellige diagnosene og tilhørende ANCA forekomst laget på bakgrunn av tall fra UpToDate.

Kilde:UptoDate: Clinical spectrum of antineutrophil cytoplasmic autoantibodies