Familien Filoviridae inkluderer virus som kan forårsake ebolasykdom og marburgsykdom, begge alvorlige former for viral hemoragisk feber (VHF) med høy dødelighet. FHI har en sentral rolle i identifikasjon av importerte enkelttilfeller og smittede nærkontakter, slik at effektive smitteverntiltak kan iverksettes for å hindre videre smittespredning.

Ved mistanke om ebolasykdom, marburgsykdom eller annen VHF skal kommuneoverlegen og eventuelt smittevernvakten ved FHI varsles umiddelbart, også før tilfellet er bekreftet. Infeksjon med ebola- og andre filovirus er melde- og varslingspliktig  til MSIS, gruppe A. Kriterier for melding er et klinisk forenlig tilfelle med epidemiologisk tilknytning eller laboratoriepåvisning av virus som forårsaker hemoragisk febersykdom ved isolering eller nukleinsyreundersøkelse.

Ved klinisk mistanke bør Vakthavende lege på beredskapslaboratoriet kontaktes før prøvetaking og eventuell innsending av prøver. Det er viktig at første sykdomsdag, reiseanamnese, eventuell reisevaksinasjon, eksponeringsopplysninger og andre relevante kliniske opplysninger oppgis.

Ved hemoragisk febersykdom forårsaket av ebola- eller marburgvirus er det ofte langvarig og høyt virusnivå i blodet. Diagnostikk gjøres derfor primært ved molekylær påvisning i EDTA-blod og/eller serum/plasma. Filovirus kan være fraværende eller forekomme i svært små mengder i blod de første dagene etter symptomdebut. Et negativt prøvesvar fra prøve tatt de første tre dagene etter symptomdebut utelukker derfor ikke ebola- eller marburgsykdom, og bør ved fortsatt mistanke følges opp med kontrollprøve etter 1–2 dager.

Ebola- og marburgvirus er klassifisert i smitterisikogruppe 4. Beredskapslaboratoriet ved FHI tilbyr molekylære analyser som dekker ebolavirus, inkludert Zaire, Sudan, Bundibugyo, Reston og Taï Forest, samt marburgvirus. Dersom prøven blir positiv, kan utfyllende eller bekreftende analyser utføres ved BSL-4-laboratoriet hos Folkhälsomyndigheten (FoHM) i Sverige, for eksempel bekreftende molekylære analyser eller dyrking av virus. Se også Beredskapsdiagnostikk for ytterligere detaljer.

Serologisk diagnostikk kan være aktuelt som supplerende eller retrospektiv diagnostikk, og krever vanligvis både akuttfaseprøve og prøve tatt etter 10–14 dager, eventuelt etter tre uker fra sykdomsdebut. Utvikling av antistoffer kan ha prognostisk verdi. Antistoffpåvisning ved nøytralisasjonstest og dyrkning av filovirus krever BSL-4 sikkerhetsnivå og kan utføres hos FoHM.

For mer informasjon om utbredelse, smittemåter og kliniske aspekter, se Smittevernhåndbokas kapittel om Ebolasykdom og Smittevernhåndbokas kapittel om Marburgsykdom

Anbefalt prøvemateriale er, så langt mulig, både inaktivert prøvemateriale og ikke-inaktivert originalmateriale.

Det bør sendes:

• ett rør med fullblod, gjerne inaktivert med DNA/RNA Shield, til primær molekylær analyse, inkludert FilmArray Global Fever Panel
• ett rør med serum eller EDTA-plasma som ikke er inaktivert, til supplerende og eventuelle bekreftende analyser

Minimum prøvevolum til analyse er 200 µL per prøveglass, men større volum kan være nødvendig ved behov for flere analyser. Dersom det ikke er mulig å sentrifugere prøven lokalt før sending, benyttes primært EDTA-rør med gel og røret vendes forsiktig 8-10 ganger umiddelbart etter fylling.

Inaktivering av prøvemateriale før innsending

Ved mistanke om viral hemoragisk febersykdom anbefales det at det, i tillegg til ordinær originalprøve, sendes inn lokalt inaktivert prøvemateriale til FHI. Dette gjør at den innledende molekylærdiagnostikken kan startes raskt og med redusert smitterisiko ved forsendelse, mottak og videre håndtering.

Til inaktivering anbefales ferdigfylte DNA/RNA Shield-prøverør (DNA/RNA Shield Blood Collection Tube) fra Zymo Research. Dette er en kommersielt tilgjengelig inaktiverings- og lagringsreagens som bevarer nukleinsyrer og samtidig inaktiverer en rekke mikroorganismer, inkludert virus, bakterier, sopp og parasitter. Produsentens dokumentasjon angir testing mot flere relevante virus, inkludert ebolavirus. FHI har i tillegg gjennomført en begrenset intern verifikasjon for beredskapsbruk, der DRS-behandlet modellvirus ikke ga påvisbar infektivitet i cellekultur.

Mikrobiologiske laboratorier bør gå til innkjøp av DNA/RNA Shield Blood Collection Tube [1] for implementering i egne lokale rutiner for håndtering av prøver ved mistanke om viral hemoragisk febersykdom. Ferdigfylte DNA/RNA Shield-prøverør fra produsenten kan forenkle prøvetakingen og redusere risikoen for eksponering ved videre håndtering av prøvematerialet. Bruken må skje i henhold til produsentens instruksjoner og laboratoriets egne risikovurderinger, biosikkerhetsrutiner og kvalitetssystem.

Ved innsending til FHI anbefales det generelt, og etter avtale med Mikrobiologisk beredskapsvakt ved FHI, å sende to separate prøvesett:

Inaktivert prøvemateriale: Prøvemateriale inaktivert lokalt med DNA/RNA Shield Blood Collection Tube i henhold til produsentens instruksjoner og lokal prosedyre. Forutsatt korrekt inaktivering og pakking, kan slikt materiale sendes som biologisk materiale, kategori B (UN3373). Dette materialet brukes primært til molekylærdiagnostikk.

Ikke-inaktivert originalmateriale: Ubehandlet prøvemateriale bør som hovedregel også sendes dersom det er mulig. Dette kan være nødvendig for supplerende analyser, bekreftende diagnostikk, karakterisering eller eventuell videre undersøkelse. Ikke-inaktivert materiale fra pasient med mistenkt viral hemoragisk febersykdom skal håndteres, pakkes og sendes som smittefarlig biologisk materiale, kategori A (UN2814), i tråd med gjeldende regelverk.

Prøvetaking og forsendelse skal alltid avklares med FHI før innsending, slik at prøvemateriale, hastegrad, emballering, transportkategori og biosikkerhet kan vurderes konkret.

• Ved mistanke om VHF bør Mikrobiologisk beredskapsvakt ved FHI kontaktes på telefon 21 07 67 60. Innsending av prøver skal avtales med vakthavende mikrobiolog før forsendelse.
• FHI rekvisisjon for mikrobiologiske analyser skal benyttes.
• Det er nødvendig for valg av analysemetode at første sykdomsdag, reiseanamnese, eventuell reisevaksinasjon, eksponeringsopplysninger og relevante kliniske opplysninger oppgis.
• Inaktivert prøvemateriale kan, forutsatt korrekt inaktivering og pakking, sendes som kategori B (UN3373).
• Ikke-inaktivert klinisk prøvemateriale fra pasient med mistanke om VHF skal sendes som kategori A (UN2814).
• Dersom prøven ikke skal sendes med en gang, bør den oppbevares kjølig ved 2–8 °C frem til sending, med mindre annet er avtalt med FHI.
• Ved transporttid under fire timer kan prøven sendes i romtemperatur, dersom annet ikke er avtalt.
• Ved transporttid over fire timer bør prøven sendes ved 2–8 °C, for eksempel i kjøleboks.
• Prøver inaktivert med Zymo DRS kan sendes i romtemperatur, også ved transporttid over fire timer.
• Det bør så langt som mulig ikke ta mer enn 24 timer fra prøvetidspunkt til prøven er fremme ved FHI.

Påvisning av de ulike ebolavirus og marburgvirus utføres ved FilmArray Global Fever Panel og RealStar Filovirus Screen RT-PCR.

For øvrige analyser har FHI avtale med BSL-4-laboratoriet ved Folkhälsomyndigheten i Sverige.

Svar gis som påvist eller ikke påvist.

Foreløpig svar basert på molekylære analyser direkte på klinisk prøvemateriale formidles per telefon.

Endelig svar, inkludert eventuelle bekreftende analyser, svares ut skriftlig.

• Hasteprøver svares som regel ut foreløpig per telefon i løpet av 2–3 timer etter at prøven er mottatt.
• Bekreftende analyser utføres fortløpende og senest påfølgende arbeidsdag, dersom relevant prøvemateriale er tilgjengelig.

Analyser for Ebola. og Marburgvirus er ikke akkreditert, men kvalitetskontrollert i henhold til ISO 17025 (Prøvings- og kalibreringslaboratorier).

Fagansvarlig: Margete Solheim

Medisinskfaglig ansvarlig: Joakim Øverbø

Håndbok om virale hemoragiske febersykdommer (FHI)